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钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。甲基百里酚蓝（methylthymol blue；MTB）比色法是一种稳定、简便、准确、直接的钙检测。钙与甲基百里酚蓝，在碱性条件下反应产生蓝色复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化（波长612nm），来定量测定钙的总浓度。其反应系统为：
产品内容
HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO阴性液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO标准液（Reagent D） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于标准样品和待测样品操作的容器
5毫升玻璃管：用于尿液样品制备的容器
微型台式离心机：用于样品制备
培养箱：用于反应孵育
比色皿：用于反应的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
一、 样品准备
选择一：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管
2． 抽取1毫升血液，置于储存管里
3． 室温下，静置30分钟，直至血液凝结（注意：血液凝集后，不宜久置）
4． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
选择二：尿液样品
1． 准备好5毫升玻璃管
2． 移取1毫升液体到玻璃管
3． 调节pH到3至4（注意：使用0.1摩尔盐酸调节）
4． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上清液到新的5毫升玻璃管
6． 加入2倍容量的用户自备的无离子水
7． 即刻置于冰槽里备用
二、 测定准备
1． 准备好上述制备的待测样品，置于冰槽里备用
2． 设定好分光光度仪：波长612nm，并置零
3． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4． 分别加入xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到2至5号管
5． 移取xx微升HEPENGBIO标准液（Reagent D）到1号管，混匀
6． 小心移取xx微升1号管的HEPENGBIO标准液（Reagent D）到2号管，混匀
7． 小心移取xx微升2号管稀释的HEPENGBIO标准液（Reagent D）到3号管，混匀
8． 小心移取xx微升3号管稀释的HEPENGBIO标准液（Reagent D）到4号管，混匀
9． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
三、（选择步骤）背景对照测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent C）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进37℃培养箱里孵育5分钟，避免光照
6． 即刻放进分光光度仪（612nm波长）检测：获得吸光读数（OD）
四、 标准样品和待测样品测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent B）
3． 加入20微升上述配制的标准液或待测样品
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进37℃培养箱里孵育5分钟，避免光照
6． 即刻放进分光光度仪（612nm波长）检测：获得吸光读数（OD）
7． 实际吸光读数：标准样品和待测样品吸光读数－背景对照吸光读数
8． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（OD）；横座标（X轴）为标准钙浓度（毫摩尔/升）
9． 根据标准曲线获得样品对应钙浓度
10． 计算样品实际钙浓度（注意：计算时，不要遗忘稀释倍数；例如尿液样品需要乘上3）
【根据标准曲线获得样品对应钙浓度（毫摩尔/升）X 样品稀释倍数】＝毫摩尔/升
注意事项
1． 本产品为50次操作，包括标准液
2． 操作时，须戴手套
3． 检测过程中，尤其在标准曲线测定过程中，先将所需的HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）和HEPENGBIO反应液（Reagent B）全部混合后，再移取1毫升工作液进行测定操作，避免操作误差
4． 避免使用EDTA、溴磺酚酞（bromosulfophthalein）、胆红素（Bilirubin）、对乙酰氨基（acetaminophen）、肼屈嗪（Hydralazine）等，否则干扰检测
5． 建议使用空腹后采集的无溶血现象的血清样品
6． 陈旧血清，尤其出现沉淀的血清，不宜使用
7． 血清钙在室温下，24小时内成分稳定；4℃条件下，可维持1周；－20℃条件下，可维持5月
8． 系统操作过程中，标准液测定只需1次
9． 孵育反应完成后即刻进行比色测定
10． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
11． 如果用户没有匹配的滤波器，可以使用600nm至650nm之间的任一波长
12． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
13． 检测敏感度在5微摩尔至4毫摩尔钙浓度范围
14． 正常血钙和尿钙浓度：小于4周新生儿：7.2至11.2毫克/分升；2月至12月婴儿：8.4至10.8毫克/分升；大于1岁：8.4至10.4毫克/分升；成人：8.6至10.2毫克/分升；尿钙24小时总量100至320毫克
15． 换算：1毫摩尔/升 X 4.01 ＝ 毫克/分升；1毫克/分升＝250微摩尔/升
本公司提供系列钙生化检测试剂产品
产品内容
HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO阴性液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO标准液（Reagent D） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于标准样品和待测样品操作的容器
5毫升玻璃管：用于尿液样品制备的容器
微型台式离心机：用于样品制备
培养箱：用于反应孵育
比色皿：用于反应的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
一、 样品准备
选择一：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管
2． 抽取1毫升血液，置于储存管里
3． 室温下，静置30分钟，直至血液凝结（注意：血液凝集后，不宜久置）
4． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
选择二：尿液样品
1． 准备好5毫升玻璃管
2． 移取1毫升液体到玻璃管
3． 调节pH到3至4（注意：使用0.1摩尔盐酸调节）
4． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上清液到新的5毫升玻璃管
6． 加入2倍容量的用户自备的无离子水
7． 即刻置于冰槽里备用
二、 测定准备
1． 准备好上述制备的待测样品，置于冰槽里备用
2． 设定好分光光度仪：波长612nm，并置零
3． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4． 分别加入xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到2至5号管
5． 移取xx微升HEPENGBIO标准液（Reagent D）到1号管，混匀
6． 小心移取xx微升1号管的HEPENGBIO标准液（Reagent D）到2号管，混匀
7． 小心移取xx微升2号管稀释的HEPENGBIO标准液（Reagent D）到3号管，混匀
8． 小心移取xx微升3号管稀释的HEPENGBIO标准液（Reagent D）到4号管，混匀
9． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） | HEPENGBIO标准液（Reagent D） | 标准钙浓度 |
| 1 | -- | xx微升 | x毫摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx毫摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx毫摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx毫摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 0 | 0 |
三、（选择步骤）背景对照测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升HEPENGBIO阴性液（Reagent C）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进37℃培养箱里孵育5分钟，避免光照
6． 即刻放进分光光度仪（612nm波长）检测：获得吸光读数（OD）
四、 标准样品和待测样品测定
1． 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent B）
3． 加入20微升上述配制的标准液或待测样品
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 放进37℃培养箱里孵育5分钟，避免光照
6． 即刻放进分光光度仪（612nm波长）检测：获得吸光读数（OD）
7． 实际吸光读数：标准样品和待测样品吸光读数－背景对照吸光读数
8． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（OD）；横座标（X轴）为标准钙浓度（毫摩尔/升）
9． 根据标准曲线获得样品对应钙浓度
10． 计算样品实际钙浓度（注意：计算时，不要遗忘稀释倍数；例如尿液样品需要乘上3）
【根据标准曲线获得样品对应钙浓度（毫摩尔/升）X 样品稀释倍数】＝毫摩尔/升
注意事项
1． 本产品为50次操作，包括标准液
2． 操作时，须戴手套
3． 检测过程中，尤其在标准曲线测定过程中，先将所需的HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）和HEPENGBIO反应液（Reagent B）全部混合后，再移取1毫升工作液进行测定操作，避免操作误差
4． 避免使用EDTA、溴磺酚酞（bromosulfophthalein）、胆红素（Bilirubin）、对乙酰氨基（acetaminophen）、肼屈嗪（Hydralazine）等，否则干扰检测
5． 建议使用空腹后采集的无溶血现象的血清样品
6． 陈旧血清，尤其出现沉淀的血清，不宜使用
7． 血清钙在室温下，24小时内成分稳定；4℃条件下，可维持1周；－20℃条件下，可维持5月
8． 系统操作过程中，标准液测定只需1次
9． 孵育反应完成后即刻进行比色测定
10． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
11． 如果用户没有匹配的滤波器，可以使用600nm至650nm之间的任一波长
12． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
13． 检测敏感度在5微摩尔至4毫摩尔钙浓度范围
14． 正常血钙和尿钙浓度：小于4周新生儿：7.2至11.2毫克/分升；2月至12月婴儿：8.4至10.8毫克/分升；大于1岁：8.4至10.4毫克/分升；成人：8.6至10.2毫克/分升；尿钙24小时总量100至320毫克
15． 换算：1毫摩尔/升 X 4.01 ＝ 毫克/分升；1毫克/分升＝250微摩尔/升
本公司提供系列钙生化检测试剂产品
