二价铁（ferrous）是氧化数为二的铁。二价铁溶解性好，生物学效价优于三价铁，因此铁首先应被还原为二价铁，才容易被生物体吸收利用。动物和人体的整个消化道都可以吸收，植物在根尖处吸收。机体大约有三分之二的铁存在于红细胞的血红蛋白和肌肉的肌红蛋白中，20％的铁以不同形式存在于肝、脾和其他组织中。铁作为氧的载体，保证组织内氧的正常输送，在细胞生物氧化和能量代谢过程中发挥着重要作用。 通过酸性氰正铁酸盐（ferricyanide）与组织中二价正铁离子（ferrous ion）结合，成为铁氰亚铁（ferrous ferricyanide），而呈现不溶性亮蓝色色素，又称为特恩布尔蓝或腾氏蓝（turnbull blue）。其反应原理如下：
 
产品内容
 
HEPENGBIO去石蜡液（Reagent A）       毫升
HEPENGBIO补水液A（Reagent B）  毫升
HEPENGBIO补水液B（Reagent C）  毫升
HEPENGBIO补水液C（Reagent D）  毫升
HEPENGBIO补水液D（Reagent E）  毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent F）  毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent G）  毫升
HEPENGBIO酸性液（Reagent H）  毫升
HEPENGBIO饱和液（Reagent I）  毫升
产品说明书  1份
 
保存方式
 
保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent G），避免光照；HEPENGBIO染色液（Reagent G）和HEPENGBIO酸性液（Reagent H）具有腐蚀性和毒性，注意操作安全；有效保证6月
 
 
 
用户自备
 
2毫升离心管：用于染色工作液配制的容器
核固红复染试剂盒（HEPENGBIO40011）：用于常规染色后复染
小型染色缸：用于石蜡切片的去石蜡和染色操作
光学显微镜：用于组织细胞染色后观察分析
 
实验步骤
 
一、 去石蜡处理
 
1． 取出10片待测的石蜡包埋的5微米厚的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
2． 放进80℃烘箱，孵育30分钟
3． 室温下静置15分钟
4． 按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸	孵育时间
xx毫升HEPENGBIO去石蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO去石蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO去石蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液A（Reagent B）	3分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液B（Reagent C）	3分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液C（Reagent D）	3分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液D（Reagent E）	3分钟

 
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO补水液D（Reagent E）
6． 小心加上x微升HEPENGBIO清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
7． 室温下孵育5分钟
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F） 
二、 样本染色处理
操作开始前，将4℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent G）和HEPENGBIO酸性液（Reagent H）置于室温下，分别移出1毫升到2.2毫升离心管，混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，用锡箔纸包裹，避免光照。然后进行下列操作。
1． 小心加上xx微升HEPENGBIO染色工作液，铺满整个切片样品表面
2． 室温下孵育60分钟；或直至可见篮色
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色工作液
4． 小心加上xx微升HEPENGBIO饱和液（Reagent I），清洗样品表面
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO饱和液（Reagent I） 
 
三、 样本复染处理
 
1． （选择步骤）样本复染处理（核固红）
2． 小心加上xx微升HEPENGBIO补水液B（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO补水液B（Reagent C）
4． 小心加上xx微升HEPENGBIO补水液A（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO补水液A（Reagent B）
6． 小心加上xx微升HEPENGBIO去石蜡液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
7． 小心移去切片上的HEPENGBIO去石蜡液（Reagent A）
8． 放上盖玻片或封片
9． 即刻在一般光学显微镜下观察：二价铁沉积阳性细胞呈现亮蓝色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）