.jpg.jpg)
产品内容
HEPENGBIO固着液A（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固着液B（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO显色液A（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO显色液B（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月
用户自备
30％蔗糖：用于样品脱水处理
无离子水：用于工作液的配制
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
无菌手术刀和镊子：用于解剖动物脑组织
小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器
切片机：用于组织切片
明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
一、 样本固着处理
1． 常规麻醉动物和手术（建议：使用生理盐水由心脏处灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清；如果切片易碎，可以使用无离子水快速冲洗组织替代灌注）
2． 即刻小心取出脑组织
3． 用无菌手术刀将脑组织切成0.5厘米厚的组织块
4． 即刻用无菌镊子夹起组织块
5． 小心转移到含有xx毫升HEPENGBIO固着液A（Reagent A）和xx毫升HEPENGBIO固着液B（Reagent B）的混合液里（20毫升/2块组织块）
6． 室温下浸泡孵育2周，避免光照
7． 小心转移到用户自备的30％蔗糖溶液里
8． 在4℃温度下浸泡孵育48小时，或组织沉底，避免光照（注意：不宜超过1周）
9． 用绵纸或滤纸吸干组织块
10． 放进－20℃冰箱里
11． 取出组织块，在－20℃条件下进行包埋后，缓慢冰冻切片，为40至150微米厚，并铺片在明胶化载玻片上（注意：碎片是常见现象，参考注意事项3和4）
12． 置于－20℃冰箱里保存
二、 样本染色处理
准备一个20毫升塑料瓶，加入10毫升用户自备的无离子水，然后分别加入xx毫升HEPENGBIO显色液A（Reagent E）和HEPENGBIO显色液B（Reagent F），混匀，标记为HEPENGBIO显色工作液（有效使用10天），避免光照。然后进行下列操作。
1． 取出待测的40至150微米厚的冰冻组织切片
2． 室温下，小心将切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分钟
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
4． 小心加上xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent D），铺满整个切片样品表面
5． 室温下孵育30分钟
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 室温下，小心将切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分钟（注意：反复轻柔搅动，清洗完全）
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
9． 小心加上xx微升HEPENGBIO显色工作液，铺满整个切片样品表面
10． 室温下孵育10至30分钟，直至呈现黑色，即刻终止，避免光照（注意：期间可以在显微镜下观察）
11． 小心移去切片上的HEPENGBIO显色工作液
12． 室温下，小心将切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分钟
13． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
14． （选择步骤）进行复染操作（建议使用HEPENGBIO甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）复染试剂盒－HEPENGBIO80052）
15． 透明处理
16． 放上盖玻片或封片（中性树脂）
17． 即刻在一般光学显微镜下观察：神经元、锥体细胞、胶质细胞、少突触胶质细胞（椭圆形如同串珠）和其它突起，呈现黑色（如果复染――细胞核呈现蓝色，胞浆尼氏（体）物质呈现粉红至紫色）
注意事项
1． 本产品为20次（40块组织和20次染色）操作
2． 操作时，须戴手套
3． 如果样品切片时，出现组织碎片，建议：第一，蔗糖处理72小时或直至组织沉底；第二，使用异戊烷快速冷冻组织30秒至1分钟，后续包埋后，再行—19℃均衡温度后切片；如果无法解决，建议使用震动切片或石蜡切片等；第三，使用震动切片前，置于6%蔗糖或加入50微升HEPENGBIO清理液（Reagent C）湿润后再行切片
4． 快速冷冻切片操作要点：固定处理后，30%蔗糖浸泡，第一个12小时换液一次，继续浸泡至72小时，可长达1周
1） 准备300毫升异戊烷在干冰里30分钟，温度达到-70℃
2） 将组织放在网架容器，缓慢放进异戊烷里30秒至1分钟。理想状态是组织完全冰冻，如果时间过久，组织会碎裂
3） 迅速取出，用预冷的棉纸去除残留异戊烷
4） 锡纸包裹，-70储存或准备切片
5） 切片机温度-19℃
6） 组织块容器置于干冰中，加入包埋液在容器里，包埋液冻住后，放进组织块，再加入少量包埋液在组织块上
7） 缓慢切片
5． 关于切片制备，参考论文《临床和实验病理学杂志》2017 Jan 33（1）,113-116页（王蕾 张芳 汤仁仙 张冠群 牛海晨）
6． 试剂具有腐蚀性，注意操作安全，尤其使用HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片：第一用毛笔涂刷；第二保持湿润3小时；第三用PARAFIN包裹后压片
8． 切片建议100至200微米，过厚和过薄不利于检测神经细胞
9． 建议使用玻璃染色缸
10． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
11． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
12． 整个操作，在避光状态下进行
13． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
14． 样品染色后保存，避免光照
本公司提供系列组织细胞神经系统成分染色试剂产品
HEPENGBIO固着液A（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固着液B（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO显色液A（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO显色液B（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月
用户自备
30％蔗糖：用于样品脱水处理
无离子水：用于工作液的配制
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
无菌手术刀和镊子：用于解剖动物脑组织
小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器
切片机：用于组织切片
明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
一、 样本固着处理
1． 常规麻醉动物和手术（建议：使用生理盐水由心脏处灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清；如果切片易碎，可以使用无离子水快速冲洗组织替代灌注）
2． 即刻小心取出脑组织
3． 用无菌手术刀将脑组织切成0.5厘米厚的组织块
4． 即刻用无菌镊子夹起组织块
5． 小心转移到含有xx毫升HEPENGBIO固着液A（Reagent A）和xx毫升HEPENGBIO固着液B（Reagent B）的混合液里（20毫升/2块组织块）
6． 室温下浸泡孵育2周，避免光照
7． 小心转移到用户自备的30％蔗糖溶液里
8． 在4℃温度下浸泡孵育48小时，或组织沉底，避免光照（注意：不宜超过1周）
9． 用绵纸或滤纸吸干组织块
10． 放进－20℃冰箱里
11． 取出组织块，在－20℃条件下进行包埋后，缓慢冰冻切片，为40至150微米厚，并铺片在明胶化载玻片上（注意：碎片是常见现象，参考注意事项3和4）
12． 置于－20℃冰箱里保存
二、 样本染色处理
准备一个20毫升塑料瓶，加入10毫升用户自备的无离子水，然后分别加入xx毫升HEPENGBIO显色液A（Reagent E）和HEPENGBIO显色液B（Reagent F），混匀，标记为HEPENGBIO显色工作液（有效使用10天），避免光照。然后进行下列操作。
1． 取出待测的40至150微米厚的冰冻组织切片
2． 室温下，小心将切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分钟
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
4． 小心加上xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent D），铺满整个切片样品表面
5． 室温下孵育30分钟
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 室温下，小心将切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分钟（注意：反复轻柔搅动，清洗完全）
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
9． 小心加上xx微升HEPENGBIO显色工作液，铺满整个切片样品表面
10． 室温下孵育10至30分钟，直至呈现黑色，即刻终止，避免光照（注意：期间可以在显微镜下观察）
11． 小心移去切片上的HEPENGBIO显色工作液
12． 室温下，小心将切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分钟
13． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
14． （选择步骤）进行复染操作（建议使用HEPENGBIO甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）复染试剂盒－HEPENGBIO80052）
15． 透明处理
16． 放上盖玻片或封片（中性树脂）
17． 即刻在一般光学显微镜下观察：神经元、锥体细胞、胶质细胞、少突触胶质细胞（椭圆形如同串珠）和其它突起，呈现黑色（如果复染――细胞核呈现蓝色，胞浆尼氏（体）物质呈现粉红至紫色）
注意事项
1． 本产品为20次（40块组织和20次染色）操作
2． 操作时，须戴手套
3． 如果样品切片时，出现组织碎片，建议：第一，蔗糖处理72小时或直至组织沉底；第二，使用异戊烷快速冷冻组织30秒至1分钟，后续包埋后，再行—19℃均衡温度后切片；如果无法解决，建议使用震动切片或石蜡切片等；第三，使用震动切片前，置于6%蔗糖或加入50微升HEPENGBIO清理液（Reagent C）湿润后再行切片
4． 快速冷冻切片操作要点：固定处理后，30%蔗糖浸泡，第一个12小时换液一次，继续浸泡至72小时，可长达1周
1） 准备300毫升异戊烷在干冰里30分钟，温度达到-70℃
2） 将组织放在网架容器，缓慢放进异戊烷里30秒至1分钟。理想状态是组织完全冰冻，如果时间过久，组织会碎裂
3） 迅速取出，用预冷的棉纸去除残留异戊烷
4） 锡纸包裹，-70储存或准备切片
5） 切片机温度-19℃
6） 组织块容器置于干冰中，加入包埋液在容器里，包埋液冻住后，放进组织块，再加入少量包埋液在组织块上
7） 缓慢切片
5． 关于切片制备，参考论文《临床和实验病理学杂志》2017 Jan 33（1）,113-116页（王蕾 张芳 汤仁仙 张冠群 牛海晨）
6． 试剂具有腐蚀性，注意操作安全，尤其使用HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片：第一用毛笔涂刷；第二保持湿润3小时；第三用PARAFIN包裹后压片
8． 切片建议100至200微米，过厚和过薄不利于检测神经细胞
9． 建议使用玻璃染色缸
10． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
11． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
12． 整个操作，在避光状态下进行
13． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
14． 样品染色后保存，避免光照
本公司提供系列组织细胞神经系统成分染色试剂产品
