测定意义
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和 NADPH 含量测 定可以计算 NADP(NADPH + NADP+ )含量和 NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途 径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要 标志之一,而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NADP+和 NADPH。NADPH 通过 PMS 的递氢作用, 使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm 下检测吸光值,从而测定 NADPH 含量。利 用 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原 NADP+为 NADPH,从而检测 NADP+含量。