HEPENGBIO组织钙调蛋白（CaM）活性酶连续循环反应光度法定量检测试剂盒产品
说明书
主要用途
HEPENGBIO组织钙调蛋白（CaM）活性酶连续循环反应光度法定量检测试剂是一种旨在通过钙调蛋白依赖性cAMP磷酸二酯酶、肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的酶连续反应系统中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光度法来测定组织裂解样品中钙调蛋白活性的方法。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体、昆虫等）钙调蛋白的活性，以及抑制剂和调节剂检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
钙调蛋白（calmodulin；CaM）属于钙结合蛋白家属中EF手型（EF hand）蛋白类之一，在所有真核细胞内表达，分布在各种不同的亚细胞结构中。钙调蛋白是一种热稳定小分子酸性蛋白，含有148氨基酸，16.7Kd大小，4个EF手型模式（motif）。钙调蛋白通过EF手型，与钙离子结合，产生构型变化，进而与各种蛋白结合，或反之，其它蛋白通过结合钙调蛋白形成复合物结合钙离子，引起一系列信号反应机制，调节机体内炎症反应、代谢、凋亡、平滑肌收缩、胞内运动、短时或长时记忆、神经生长和免疫反应等，更是钙离子感受器和调控缓冲分子。基于腺苷-3',5'-环化一磷酸磷酸二酯酶（cyclic adenine monophosphate phosphodiesterase；cAMP PDE；EC3.1.4.17 ）是钙调蛋白依赖性。钙调蛋白激活磷酸二酯酶催化环核苷酸（cAMP）的磷酸二酯键（phosphodiester bond）的水解，产生1-磷酸腺苷，进而通过肌激酶（myokinase）、 丙酮酸激酶（pyruvate kinase）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase）系统，测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）的吸光峰值的变化（340nm 波长），来定量分析钙调蛋白的活性。其连续循环反应系统为：
 
     phosphodiesterase 
cAMP  +  H2O     →      AMP  
calmodulin
 
myokinase
AMP  +  ATP  →  2 ADP
 
pyruvate kinase
2 ADP  + 2 phosphoenolpyruvate   →    2 ATP  +  2 pyruvate   
 
lactate dehydrogenase 
2 pyruvate  +  2 NADH    →  2 lactate  +  2 NAD＋ 
（高吸收峰） （低吸收峰）
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A）     60毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）     10毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）     10毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent D）     500微升
HEPENGBIO酶促液（Reagent E）     500微升
HEPENGBIO底物液（Reagent F）   250微升
HEPENGBIO阴性液（Reagent G）   500微升
产品说明书         1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO清理液（Reagent A）保存在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月
 
用户自备
 
1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
DOUNCE匀浆器：用于细胞匀化
（微型）台式离心机：用于样品操作
200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于光度分析