脂滴（lipid droplet）是细胞中由中性脂质（甘油三酯、胆固醇酯）和少量蛋白为核心，外包一层磷脂和胆固醇构成的带有蛋白的膜。可见于大多数培养细胞中。在脂肪细胞中，脂滴存储大量甘油三酯，作为能量之源，而在其它细胞中，用于胆固醇内平衡的维持。脂滴具有帮助膜合成和修复，固醇类激素合成，以及提供脂类代谢酶的底物等功能。通过差速和等密度离心处理，获得脂滴细胞器，用于后续脂质定量和蛋白分离等。  
 
产品内容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）   毫升
HEPENGBIO低渗液（Reagent B）      毫升
HEPENGBIO分离液A（Reagent C）   毫升
HEPENGBIO分离液B（Reagent D）   毫升
产品说明书   1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO低渗液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
 
用户自备
 
HANK平衡盐缓冲溶液（HEPENGBIO12028）或PBS缓冲溶液（HEPENGBIO12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
台式离心机：用于样品操作
超速离心机：用于样品操作
DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞
涡旋震荡仪：用于混匀
 
实验步骤
 
实验开始前，将试剂盒里的试剂置于冰槽里冻融备用。然后进行下列操作。
 
1． 准备5至10瓶75cm²细胞培养瓶的细胞（5 X 10⁷），直至细胞生长铺满整个培养表面
2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3． 重复实验步骤2一次
4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面
5． 置入37℃培养箱3分种
6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落
7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入一个50毫升锥形离心管
9． 放入台式离心机离心10分钟，速度为1000g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀细胞
12． 放入台式离心机离心10分钟，速度为1000g
13． 小心抽去上清液
14． 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO低渗液（Reagent B）
15． 涡旋震荡5秒，充分混匀
16． 冰上孵育10分钟
17． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
18． 置于冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约40下）
19． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管 
20． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g
21． 小心移出1毫升白色悬浮脂质层到新的15毫升锥形离心管
22． 放进－70℃冰箱里备用或放进冰槽里继续后续操作
23． 加入预冷的xx微升HEPENGBIO分离液A（Reagent C），混匀（注意：将脂质团均匀混匀）
24． 转移到13毫升超速离心管
25． 小心沿着管壁，在样品上面，一滴一滴加入xx毫升HEPENGBIO分离液B（Reagent D）（注意：避免晃动）
26． 小心沿着管壁，一滴一滴加入xx毫升HEPENGBIO低渗液（Reagent B）在HEPENGBIO分离液B（Reagent D）上面，直至加满离心管（注意：避免晃动）
27． 小心放进4℃超速离心机离心30分钟，速度为28000g 
28． 小心取出离心管 
29． 小心抽取悬浮不透明的白色脂质层到新的15毫升离心管 
30． 加入适量预冷的HEPENGBIO低渗液（Reagent B），混匀
31． 放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作（脂质定量、脂滴蛋白萃取等）