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HEPENGBIO细胞AMPK激酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO细胞AMPK激酶活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过多肽底物受到AMPK磷酸化后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应， 即采用光度法测定其氧化后峰值的变化，以分析细胞裂解样品中AMPK活性的方法。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中AMPK激酶的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。
技术背景
5’AMP活化蛋白激酶（5’AMP activated protein kinase；AMPK）属于丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家属成员之一。其为从酵母到人体高度进化保留的激酶复合物，由3个亚体，α、β、γ构成：其中γ亚体有4个胱硫醚β合酶（cystathione beta synthase；CBS）结构域，又称为巴特曼（Bateman）结构域，以探测AMP和ATP的比例；α亚体含有催化结构域，一旦收到AMPKK或LKB1/MO25/STRAD 复合物催化的磷酸化后，AMPK被激活。所有亚体都有不同异构体形式，包括α1、α2、β1、β2、γ1、γ2和γ3。其功能在于保持细胞能量内环境恒定：促进脂肪酸β氧化、抑制胆固醇合成、促进肌肉葡萄糖吸收和调节胰岛素分泌等。AMPK在肝脏、脑和肌肉组织中高度表达。其磷酸化目标序列为 LKKLTRASFFGQ。基于底物LKKLTRASFFGQ，在ATP的存在下，受到5’AMP活化蛋白激酶的磷酸化，获得产物磷酸化多肽，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析5’AMP活化蛋白激酶的活性。其反应方式为：
AMPK
LKKLTRASFFGQ  +  ATP  →  LKKLTRApSFFGQ  +  ADP
 
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate  +  ADP       →      pyruvate  +  ATP
         
lactate dehydrogenase
pyruvate  +  NADH       →      lactate  +  NAD+
           （高吸收峰） （低吸收峰）